10×堿性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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規格
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BP5015
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10×堿性蛋白Native
PAGE轉膜緩沖液
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500
ml
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簡(jiǎn)介：
10×堿性蛋白Native PAGE轉膜緩沖液適用于堿性蛋白電泳后凝膠上非變性堿性蛋白的轉膜。本轉膜液配制便捷，稀釋后無(wú)需調節pH值。緩沖液中不含任何變性劑，保證了轉膜中維持蛋白的活性狀態(tài)。該緩沖液稀釋10倍可配成5升即用型1×緩沖液。
保存條件：
常溫保存，兩年有效。
配制方法：
將10×轉膜緩沖液用超純水稀釋10倍即配成1×即用型轉膜緩沖液。
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1×即用型轉膜緩沖液
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500 ml
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1 L
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10×轉膜緩沖液
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50
ml
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100
ml
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超純水
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450
ml
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900
ml
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不用調節pH
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使用方法：
1. 堿性蛋白非變性電泳：
各種蛋白質(zhì)分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數目不同，因而有各自的等電點(diǎn)。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)稱(chēng)為堿性蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)偏堿性，如組蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)，等電點(diǎn)就偏酸性。分離堿性蛋白時(shí)候，要利用低 pH 凝膠系統，分離酸性蛋白時(shí)候，要利用高 pH 凝膠系統。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統，蛋白會(huì )帶負電荷，蛋白會(huì )相陽(yáng)極移動(dòng)；而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進(jìn)行，蛋白帶正電荷，這時(shí)候需要將陰極和陽(yáng)極倒置才可以電泳。堿性蛋白電泳可參考使用堿性蛋白非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號:RTD6131）。
2. 轉膜：
① 轉膜方法：堿性蛋白在非變性狀態(tài)的轉膜建議用濕轉法。
② 三明治結構：由于堿性蛋白pI＞7 在酸性轉膜緩沖液中帶正電荷，轉膜三明治結構與傳統轉膜不同（傳統的酸性蛋白轉膜是根據“黑膠白膜”制作三明治）。堿性蛋白轉膜根據“黑膜白膠”制作三明治，即膜置于轉膜夾芯負極，凝膠置于轉膜夾芯正極，這樣凝膠上帶正電荷的堿性蛋白才能轉移到膜上。
堿性蛋白轉膜三明治制作：
負極（電轉夾黑色面）-海綿墊-3至5層濾紙-膜-凝膠-3至5層濾紙-海綿墊-正極（電轉夾白色面）
③ 膜的選擇：膜可以用PVDF膜或NC膜，根據蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說(shuō)來(lái)，大于20kD蛋白選擇0.45μm孔徑，低于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無(wú)水甲醇潤濕活化，NC膜只需用轉膜緩沖液潤濕就可以。
④ 轉膜條件：
由于在非變性條件下，不同堿性蛋白的空間結構，聚合狀態(tài)，電荷數量都有不同，以下轉膜條件僅供參考，客戶(hù)針對自己的目的蛋白，最好經(jīng)過(guò)1-2次預實(shí)驗后，確定最佳的轉膜條件。
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蛋白大小
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穩流
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建議時(shí)間
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降溫措施
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低于70kD
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180 mA
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2 小時(shí)
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需要
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高于70kD
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300 mA
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1.5 小時(shí)
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需要
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